Вирусный гепатит утят: возбудитель, патогенез, симптомы и течение болезни, диагноз, иммунитет и иммунизация, профилактика, лечение, меры борьбы

Обновлено: 17.09.2024

Этиология. Возбудитель - вирус семейства Orthomyxoviridae. Известно 16 вариантов структуры гемагглютинина (H) и 9 нейраминидазы (N), которые могут сочетаться в различных комбинациях. Патогенность варьируется. У домашней птицы наиболее распространены высокопатогенные (ВГП) - Н5N2, Н5N1, Н5N8, Н7N9; и низкопатогенный (НГП) - Н9N2.

Эпизоотология. Болеют куры, индейки, утки, дикие птицы. Наиболее распространенный фекально-оральный путь передачи, в том числе через векторы (люди, насекомые, грызуны, перемещаемое оборудование); аэрозольный - в основном в пределах одного стада. Вертикального пути передачи нет -вирус убивает эмбрион, перенос только через загрязненную поверхность яйца, поэтому дезинфекция обязательна. Дикие птицы являются переносчиками. Выделение вируса - 7-10 дней. Переболевшая птица приобретает напряжённый иммунитет только против гомологичного подтипа вируса. Вирус не особо стойкий. Многие дезинфектанты эффективны. Важно удалить органический материал. Эффективно уничтожается в помете при правильном компостировании.

Профилактика

В РФ болезнь подлежит обязательной регистрации, ее контроль осуществляется в соответствии с «Правилами по борьбе с гриппом птиц», утвержденными приказом Минсельхоза РФ от 06.07.2006 года №195.

При подтверждении вспышки высокопатогенного гриппа птиц производят уничтожение восприимчивого поголовья бескровным способом.

При подтверждении заболевания, вызванного штаммом НГП, уничтожение восприимчивого поголовья, как правило, не проводится. Меры борьбы и профилактики на различных типах выращиваемой птицы будут отличатся.

Для бройлеров существует два варианта действий:

уничтожение восприимчивого поголовья, проведение санитарно-гигиенических мероприятий, корректировка технологической карты посадок, вакцинация новых партий бройлеров в сутки гомологичной инактивированной вакциной, трехкратная вакцинация родительского поголовья гомологичной инактивированной вакциной;
второй вариант отличается тем, что не проводится депопуляция поголовья и корректировка технологической карты посадок. По опыту птицефабрик, последний вариант не дает желаемого результата, т.к. без прекращения циркуляции вируса НГП в хозяйстве применяемые меры профилактики, в том числе вакцинация, малоэффективны. Как следствие - продолжение получения низкой прибыли птицефабрики за счет низкой рентабельности производства.

Особенности и цели вакцинации, особенности течения гриппозной инфекции на привитом поголовье:

«Полевой» и вакцинный штаммы должны совпадать по гемагглютинину и нейраминидазе, между подтипами нет общей защиты, даже в самом подтипе она неполная;
Вакцинация защищает птиц от клинического проявления заболевания и смерти при наборе защитного титра АТ, но не от заражения. Снижает выделение «полевого» вируса в окружающую среду от птицы при достижении защитного уровня АТ;
Вакцинация увеличивает порог вирусной инфекции. Клеточный иммунитет не выражен;
Трехкратная вакцинация родительского стада должна обеспечить защиту бройлеров в течение первых 10-18 дней жизни;
Применяемая вакцина должна вписываться в DIVA-стратегию;
Без уничтожения возбудителя в окружающей среде сохраняется «окно» для вхождения вируса.

Симптомы птичьего гриппа

Зависят от патогенности (ВГП или НГП).

При ВГП скоротечное начало с повышенной смертностью еще до появления клинических симптомов, подавленностью, снижение потребления корма и воды, резкое снижением яйценоскости; смертность может достигать 50—90%. Инкубационный период у одной птицы -от нескольких часов до 3-х суток, в стаде - от нескольких дней до 2-х недель. Незадолго до гибели — цианоз гребня и серёжек, слизистые гиперемированы, дыхание хриплое, учащённое, Наблюдают также диарею, помёт окрашен в коричнево-зелёный цвет, нервные явления. Может идти кровь из ротовой полости.

При НГП наблюдаются легкие респираторные симптомы, снижение яйценоскости незначительное или отсутствует, неврологических симптомов нет. Является катализатором для возникновения других респираторных заболеваний, наблюдают синергетический эффект, приводящий к высокому падежу. Падеж на бройлерном поголовье значительный, начиная с 3-х недельного возраста при осложнении вторичной микрофлорой.

Патоморфология. Обнаруживают катаральные и катарально-геморрагические поражения слизистых оболочек пищеварительного тракта и дыхательных путей, подкожные отёки в области глотки, гортани, шеи, груди, ног, множественные точечные кровоизлияния в желудке, кишечнике, селезёнке, печени, почках и сердце, овариит, сальпенгит.

Схема вакцинопрофилактики против НГП бройлеров

Ожидаемые средние титры после вакцинации бройлеров (данные компании БиоЧек)

Диагностика

Предварительно на основании клиническо-эпизоотических данных, патоморфологических изменений; окончательно диагноз подтверждается данными лабораторных исследований - ПЦР, обнаружение специфических антител в сыворотке методом ИФА после заражения или при плановом исследовании.

Дифференцируют от инфекционного ларинготрахеита, болезни Ньюкасла, респираторного микоплазмоза, инфекционного бронхита, , колибактериозов.

Схема вакцинопрофилактики против НГП ремонтного молодняка

Ожидаемые средние титры после вакцинации ремонтного молодняка (данные компании БиоЧек)

вирус гепатита утят культура клеток репликация температура 2. Беньеш-Мельник М.Б. Маркирующие признаки вируса полиомиелита и их отношение к вирулентности штаммов вируса для обезьян / М. Беньеш-Мельник, Дж. Мельник // Полиомиелитная пероральная живая вакцина. - М., 1961. - С.210-223. 3. Бочкарев В.С. Иммунобиологические свойства вакцинных штаммов метапневмовируса птиц: автореф. дис. канд. вет. наук/ В.С. Бочкарев. - СПб., 2013. - 22 с. 4. Князев В.П. Некоторые аспекты диагностики, лечения и специфической профилактики вирусных инфекций уток: монография / В.П. Князев, О.В. Белорыбкина, С.Р. Кременчугская, Т.А. Фомина. - Владимир, 2003. - 60с. 5. Князев В.П. Болезни водоплавающих птиц: монография/ В.П. Князев. - Владимир, 2010. - 160с. 6. Майборода А.Д. Действие вируса гепатита утят на клетки тканевых культур почек цыплят и утиных эмбрионов/А.Д. Майборода // Ветеринария. - 1965. - № 8. - С. 28. 7. Майборода А.Д. Формирование вируса гепатита уток в культуре клеток/А.Д. Майборода // Ветеринария. - 1972. - № 8. - С. 50. 8. Паникар И.И. Вирусный гепатит утят и его профилактика / И.И. Паникар. - М. Россельхозиздат, 1987. - 63с. 9. Сарбаева Н.В. Сравнительная характеристика вакцинного и эпизоотических штаммов реовируса теносиновита кур: автореф. дис. … канд. биол. наук/ Н.В. Сарбаева. - М., 1997. - 23с. 10. Сюрин В.Н. Ветеринарная вирусология / В.Н. Сюрин, Р.В. Белоусова, Н.В. Фомина. - М.: Агропромиздат, 1991. - С.376. 11. Трефилов Б.Б. Сравнительное изучение генетических признаков вакцинных штаммов вируса инфекционного ларинготрахеит птиц: автореф. дис. канд. биол. наук / Б.Б. Трефилов. - Тарту, 1972. - 27с. 12. Трефилов Б.Б. Разработка и внедрение средств диагностики и специфической профилактики наиболее опасных вирусных болезней птиц (инфекционный ларинготрахеит, вирусный энтерит гусей, реовирусный теносиновит): автореф. дис. д-ра вет. наук/ Б.Б. Трефилов. - СПб., 2000. - 42с. 13. Heide L. Development of an attenuated apatogenic reovirus vaccine against viral arthritig / tenosynovitis// L. Heide, M. Kalbac, M. Brustolon. Av. Dis, 1985. - Vol.27. - No. 3. - P. 689-706. 14. Jin X. Identification and molecular analysis of the highly pathogenic duck hepatitis virus type 1 in Hubei Province of China/ X. Jin, W. Zhang, W. Zhang [et al.]// Res. Vet. Sci., 2008. - V. 85. - P. 595-598. 15. Patnayak D.P. Cold-adapted avian pneumovirus of use as live, attenuated vaccine in turkeys / D.P.Patnayak, B.R.Gulati, M.A.Sheikh [et al.] // Vaccine. - 2003. - V.21. - P..1371-1374. 16. Tseng C.H. Molecular analysis of duck hepatitis virus type 1 indicates that it should be assigned to a new genus/ C.H.Tseng, N.J. Knowles, H.J. Tsai // Virus Res., 2007. - V. 123. - P. 190-203. 17. Woolcock P.R. Duck hepatitis/ P.R. Woolcock , Y.M. Saif, A.M. Fadly [et al.] // In: Diseases of Poultry 12th Edition, 2008. - P. 373-384.

Вирусный гепатит утят (ВГУ) - высоко контагиозная, остро протекающая среди утят и латентно среди уток болезнь, с преимущественным поражением печени. Эта болезнь до настоящего времени имеет широкое распространение в утководческих хозяйствах промышленного типа и сопровождается высокой смертностью утят 1-30 - суточного возраста, достигая до 30-95 % [4,5,17].

Вирус гепатита утят типа I относится к семейству Picarnoviridae роду Avihepatovirus [14,16].

Вирус удается культивировать на первичных клетках печени и почки эмбрионов уток и гусей [1,6], а также на фибробластах утиного и куриного эмбрионов с коллагеназой [1,7,8].

Метод тканевых культур находит все большее применение в генетических исследованиях с вирусами животных и человека. С его помощью изучен целый ряд важных генетических признаков вирусов: цитопатогенная, бляшкообразующая, интерфероногенная активность, чувствительность к экзогенному интерферону, способность к репликации при различных температурах и другие.

Способность вирусов к репродукции и способность вызывать цитопатогенное действие в клеточных культурах, а также их репликация при различных температурах культивирования являются наследственными биологическими признаками.

Работами ряда исследователей показана возможность изменения наследственных свойств вирусов путем пассажей в культуре клеток при пониженной и повышенной температурах. Усиленное применение этого метода оказалось тесно связано с глубоким изучением способности вирусов к репликации при определенной температуре, так называемого rct - признака.

Доказано, что rct - маркер вирусов является наследственным свойством и даже отдельные штаммы одного вируса обладают не одинаковым rct - признаком [3,9, 11,12,15].

Зависимость между rct - признаком и патогенностью составляет в настоящее время сущность теоретического обоснования применения метода пассажей у культуре клеток при неоптимальных температурах для получения вирусных вакцин с измененными биологическими свойствами [13,15].

Учитывая, что в литературе слабо освещен вопрос о способности вируса гепатита утят к репликации в тех или иных видах тканевых культурах и отсутствие данных по культивированию вируса при различных температурах, целью наших исследований явилось изучение способности вакцинных штаммов вируса гепатита утят к репликации в культурах клеток при различных температурах культивирования ( TC и rct - маркеры).

Материалы и методы исследований

Вирус. В работе использовали производственные вакцинные штаммы ВГНКИ-К и ЗМ-УНИИП вируса гепатита утят, культивируемые в культуре утиных фибробластов при температуре 37 º С, и хранили при минус 20 º С.

Культуры клеток: культура фибробластов 10-12 - суточных куриных эмбрионов (ФЭК); культура фибробластов 14-15 - суточных утиных эмбрионов (ФЭУ); культура клеток печени 25-27 - суточных утиных эмбрионов; культура клеток почки 25-27 - суточных утиных эмбрионов.

Первично-трипсинизированную культуру клеток готовили из кожно-мышечной ткани, печени и почек куриных и утиных эмбрионов по методике Dulbecco R.&Vogt M. (1954) в модификации Younger J.S. (1954) [10].

В качестве питательной ростовой среды использовали среду Игла МЕМ/ДМЕМ и среду 199 в соотношении 2:1 с добавлением 10 % нормальной сыворотки крупного рогатого скота и антибиотиков: бензилпенициллина 100 ЕД/см 3 и стрептомицина сульфата - 100 мкг/см 3 . Раствор для диспергирования ткани состоял из 0,25 % раствора трипсина, 0,02 % раствора версена и раствора Хенкса в соотношении 1:2:2. Трипсинизацию проводили на магнитной мешалке при температуре 36-37 ºС в течение 10-15 мин до полного расщепления фрагментов ткани на отдельные клетки. По истечении указанного времени клеточную взвесь сливали во флаконы с охлажденной смесью сыворотки крови крупного рогатого скота до 10 % и среды Игла (соотношение 1:1) с целью нейтрализации действия трипсина.

Суспензию клеток центрифугировали при 900-1000 об/мин в течение 20 мин. Из осадка после ресуспензирования готовили суспензию клеток в питательной ростовой среде с содержанием 650-750 тыс. кл./см 3 . Клеточную суспензию разливали в пробирки и матрасы по 2 и 220 см 3 соответственно и инкубировали в стационарных условиях при температуре (37,0±0,5)º С. В течение 48 часов на поверхности стекла формировался клеточный монослой.

Определение Rct TC признака. Способность вакцинных штаммов к репликации при неоптимальных температурах изучали путем 5-кратного пассирования в культуре фибробластов утиных эмбрионов. Культивирование зараженных и контрольных клеток проводили при температурах 32 и 40 ° C, учитывая время наступления и характер ЦПД в культуре клеток. Инфицирование ФЭУ проводили в дозе 1,0 ЦПД₅₀ на клетку. После 1, 3 и 5-го пассажа определяли инфекционный титр вируса методом титрования и выражали в lg ТЦД₅₀/см 3 .

Rct TC признак штаммов вируса, определяли по методу М. Беньеш-Мельник и Дж.Л. Мельник (1961) [2] , в основе которого лежит вычисление разности между титрами изучаемых штаммов вируса при 37 и 32 ° C или 37 и 40 ° C. Так, rct_32° - /rct_40° - / - разница титров вируса больше 4 lg ТЦД₅₀/см 3 ; rct_32° + / rct_40° + / - разница титров вируса меньше 2 lg ТЦД₅₀/см 3 ; rct₃₂ о± / rct₄₀ о± / - разница титров вируса от 2,1 до 4 lg ТЦД₅₀/см 3 .

Титрование вируса на культуре клеток по цитопатогенному действию (ЦПД) проводили в культурах клеток методом десятикратных разведений и с соответствующими контролями.

Величину титра вычисляли по методу Reed L.J. & Muench H. (1938) [10] и выражали в lg ТЦД₅₀ в 1.0 см 3 (тканевая цитопатогенная доза).

Статистическую обработку результатов проводили по общепринятым методам.

Результаты исследований и обсуждение

Вакцинные штаммы ВГНКИ-К и ЗМ-УНИИП вируса гепатита утят вызывали острую форму вирусной инфекции в культурах клеток куриных и утиных эмбрионов при температурах культивирования 32, 37 и 40 º С. Цитопатогенное действие сопровождалось округлением клеток на ограниченных участках монослоя, появлением симпластических образований с зернистостью в цитоплазме клеток через 72-96 часов после инокуляции, а на последней стадии репликации вируса формированием синцития и дегенерацией клеточного монослоя через 96-120 часов культивирования. Латентная фаза штамма ВГНКИ-К при температуре 37 º С составила 24 часов и 48 часов штамма ЗМ-УНИИП, а при температуре 32 и 40 º С она равнялась у штаммов ВГНКИ-К и ЗМ-УНИИП 72 и 48 часам соответственно. .Данные определения активности штаммов в различных первично-трипсинизированных культурах клеток при температуре 37 º С представлены в табл. 1.

Биологическая активность вакцинных штаммов ВГНКИ-К и 3М-УНИИП вируса гепатита утят в культурах клеток при 37 º С

Читайте также: